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本制品是基于BalBcellProbe L01荧光探针进行溶酶体特异性染色的试剂盒。BalBcellProbe L01溶酶体染色探针为绿色荧光标记的溶酶体探针，具有504/511nm的最大激发/发射波长。

BalBcellProbe L系列探针是对活细胞中的溶酶体进行选择性染色的一类荧光染料，该系列探针可自由穿过细胞膜，进入细胞后可以选择性标记溶酶体。BalBcellProbe L系列探针适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。

百奥莱博BalBcellProbe L系列溶酶体探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针，百奥莱博还可以提供红色、蓝色、橙色等颜色的染色试剂盒。

• 染料短期2周内可以2～8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
  
• 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
  
• 开盖后组分按要求条件保存，有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完。

以每个样品使用200μL染色液计，按4000倍稀释使用，本试剂盒小包装大约可以染色500个样本，大包装大约可以染色1000个样本。

• 仪器准备：激光共聚焦/荧光显微镜、离心机、移液器、冰箱、冰盒
  
• 试剂准备：1×PBS缓冲液(pH7.4,10mM)、HBSS缓冲液(含钙镁葡萄糖，不含酚红)
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套

• L01染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
  
• 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
  
• 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
  
• 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
  
• 染色后立即进行分析。
  
• 一般原位染色比收集后染色使用更高的浓度。

• 染色工作液配制：根据样本数量，用染料稀释液将BalBcellProbe L01荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的无血清培养基400～250倍稀释，配制成染色工作液。
  
  • 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。
    
  • 可以不用试剂盒中的稀释液，直接用HBSS缓冲液或者相应的无血清培养基稀释也可。
    
  • 开始实验前，使用HBSS缓冲液或培养基稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色时终浓度为试剂盒中的染料母液的4000～2500倍稀释。一般细胞预实验时按4000倍稀释使用，有些细胞染色浓度可能需要提高至2500～3000倍稀释使用。
    
  • 工作液现配现用。
    
  • 为了降低探针加载过度可能对细胞的影响，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
    
  • 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。
• 细胞染色：
  
  • 对于贴壁细胞：
    
    • 将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
      
    • 待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30分钟～2小时。
      
      具体孵育时间需根据细胞类型而定。
    • 利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
  • 对于悬浮细胞：
    
    • 离心，吸除上清。
      
    • 利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30分钟～2小时（具体时间需根据细胞类型而定）。
      
    • 离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
      
    • 置于荧光镜下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。
    对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
• 观察结果：在荧光显微镜（含合适滤片）下观察细胞。最大激发/发射波长为504/511nm。